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細(xì)胞活性是指細(xì)胞在特定條件下能夠維持正常生命活動的能力,包括細(xì)胞的代謝、生長、分裂和對刺激的反應(yīng)。在生物研究和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,細(xì)胞活性的檢測對于評估細(xì)胞健康狀態(tài)、藥物效果、細(xì)胞毒性以及細(xì)胞增殖能力等方面至關(guān)重要。
1、細(xì)胞代謝檢測:
l MTT法:通過活細(xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶還原MTT生成不溶性的甲臜,來反映細(xì)胞活性。
l CCK-8法:基于WST-8的比色法,檢測細(xì)胞增殖和毒性,生成的甲臜是水溶性的,簡化了操作步驟。
l ATP生物發(fā)光法:利用細(xì)胞內(nèi)ATP含量與活細(xì)胞數(shù)呈線性關(guān)系,通過熒光素酶催化反應(yīng)檢測ATP,快速且靈敏。
l Alamar Blue法:使用Alamar Blue試劑,通過檢測氧化還原狀態(tài)反映細(xì)胞代謝活性。
2、細(xì)胞計數(shù)檢測:
臺盼藍(lán)染色法:利用死細(xì)胞對臺盼藍(lán)的吸收性,通過顯微鏡計數(shù)區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。
AO/PI染色法:吖啶橙(AO)和碘化丙啶(PI)的組合,用于區(qū)分活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和死細(xì)胞。
3、克隆(集落)形成試驗:
通過計算單個細(xì)胞形成克隆的能力來評估細(xì)胞增殖潛力,適用于抗腫瘤藥物敏感性試驗等。該方法較為繁瑣,耗時較長,不適合大規(guī)模樣本同時監(jiān)測。
4、DNA合成檢測:
使用EdU等胸腺嘧啶核苷類似物代替T滲入復(fù)制中的DNA,通過特異性熒光染料反應(yīng)檢測DNA復(fù)制活性,反映細(xì)胞增殖情況。
這些方法各有優(yōu)缺點,選擇合適的檢測方法取決于實驗?zāi)康?、所需檢測的細(xì)胞類型、實驗條件以及設(shè)備的可用性。在細(xì)胞活性檢測中,確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性至關(guān)重要,因此在實驗設(shè)計和操作過程中需要嚴(yán)格控制變量,遵循標(biāo)準(zhǔn)操作程序。